基础研究到临床试验2

蕲蛇酶的基础研究到临床试验

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    五、I期临床研究
    1．对健康人的反应
    健康志愿者18人，男11人，女7人，平均年龄40±6岁，分3组，分别一次静脉滴注蕲蛇酶注射液1，2及3AU。药前及药后6h采血小板及血液凝固系统各项指标的测定，血小板自数目152±28X10⁹／L降至38—20±10⁹／L。血小板聚集抑制率达71.95±24%与对照组比较差异非常明显(P<0.01)。血浆纤维蛋白原含量自4.4±0.9g／L，降至3.5±0.9g／L，部分凝血活酶时间自42±4秒延长为113—152±43秒，差异均非常显著(P<0.01)。凝血酶原时间轻度延长。血浆纤维蛋白降解产物(FDP)从7±3.0增加到30±11.5mg／L，提示用药后纤维蛋白降解增多。此外血浆优球蛋白溶解时间缩短，揭示血浆t—PA活性增强。根据上述血液凝固系统的变化。说明蕲蛇酶由于降低了血浆纤维蛋白原含量及血小板数目并抑制聚集率，延长了血液凝固时间，导致动、静脉血栓形难于形成，即使已形成者又能促进消退。
    静脉给药后，3种剂量对血白液蛋白、球蛋白、胆红素含量、肝功能(AST、ALT、ALP)、肾功能(尿素氮、肌酐)均无影响。对血液含量不引起明显变化。对总胆固醇用药2AU及3AU者则有明显降低，从5.2±0.6降至3.7±0.6mmol／L。用药后呼吸、血压、心电图及体温均在正常范围内，说明蕲蛇酶注射液在临床应用是有效而无不良反应。
    2．在健康人身上的药物代谢动力学
    健康志愿者14名，男性9人，女性5人，除研究者本人(女，64岁)外平均年龄25.8±6.5岁，平均体重57.3±9.Okg。经体检及生化检验，各项指标均属正常。受试对象分3组，分别注射蕲蛇酶1(3例)，2(6例)，3(5例)AU。实验在上午8：00左右开始，把稀释于100ml注射用生理盐水中的蕲蛇酶注射在30min内滴完(T二0.5h)。滴完后立即按下列时间(0.5、1、2、4、8、12、24、36及48h)自静脉采血0.5ml，用枸橼酸钠抗凝，低温离心。取血浆0.1在55孔聚苯乙烯反应板上，按ELISA程序作含量测定。用PKBP—NI程序包计算药代动力学参数，以残差平方和(RE)和赤池信息判据(AIC)值作为模型识别依据。
    结果3种剂量的血药浓度时程关系符合二室开放模型，按一级动力学消除。其拟合的参数方程如下：
Cp^ivinf1Au=24.84e^-0.776t+6.27e^-0.044t
Cp^ivinf2Au=24.84e^-0.808t+6.27e^-0.037t
Cp^ivinf3Au=24.84e^-0.760t+6.27e^-0.037t
    其中三种剂量的T_1/2α依次为0.66±0.1lh，0.96±0.34h，1.22±0.7h，T_1／2β为15.95±2.4h，18.80±4.94h，19.73±4.2h，表现分布容积(Vd)依次为5.4±1.5L·kg^-1，5.4±1.8L·kg^-1，5.5±1.2L·kg^-1。蕲蛇酶大部分从尿排出，药后24h排出达高峰，24h尿中已测不到。
    六、Ⅱ期临床研究
    为考察本品对急性脑梗塞的治疗效果及不良反应，经卫生部药政局批准由北京医科大学第一医院神经内科任组长单位，进行Ⅱ期临床试验。参加单位有北京医科大学第三医院，北京友谊医院，福建医学院附属第一医院及福建省立医院。
    共入选颈内动脉系统的急性脑梗塞409例。分两阶段进行，第一阶段为随机双盲安慰剂对照试验，共200例，其中对照组、试验组各100例，第二阶段为开放试验209例。
    试验采用的给药方法为：试验药(0.75AU／ml)或对照药lml溶于250～500ml生理盐水静脉点滴(3h以上滴完)，之后继续用200mg维脑路通溶于500ml液体中静脉点滴，每日一次，7天为一疗程；停药5天后开始第二疗程。
    试验结束后，根据扬州会议所规定的疗效评定标准，进行临床疗效统计，并观察该药对血小板聚集率、血浆粘度、纤维蛋白原、红细胞压积、凝血酶原时间、凝血酶原活动及血脂等有关化验指标的影响。
    其结果表明：
    双盲试验的试验组的疗效优于对照组，尤以两疗程的疗效最好，其总有效率分别为94.9%和79.5%。血小板聚集率、纤维蛋白原含量的下降幅度，试验组明显高于对照组。
    Ⅱ期临床试验，总数309例两疗程治疗后，第一疗程基本痊愈11.8%，显著进步28.1%，进步31.7%，无效27.8%，恶化0.6%。一疗程总有效率(基本痊愈+显著进步+进步)为71.6%。两疗程基本痊愈24.9%，显著进步48.0%，进步19.3%，无效7.8%，无恶化。两疗程总有效率92.2%。
    在试验过程中，有部分病例出现血小板计数下降，这些血小板下降病例，并不伴有任何出血倾向，且很快自行回升。6例出现皮肤过敏。1例牙龈小范围出血，1例全身皮肤散在出血点，4例梗塞后出血(梗塞后出血量均很小)，以上所有病例均未予特殊处理，症状均消退，预后均良好。家兔实验观察，较小剂量(1·iv)仅使血不板变形，伸出伪足，较大剂量(3AU／kg)能使其活化，脱颗粒，并浓集于脾脏，使外周计数下降。
    总之，Ⅱ期临床试验显示：蕲蛇酶是治疗急性脑梗塞病有效安全的药物。
    七、Ⅲ期临床研究
    按新药审批办法，I、Ⅱ类新药在完成Ⅱ期临床研究，获得新药试产证书后，应进行Ⅲ期临床研究，扩大应用病例，以全面观察药物的安全性及有效性。
    研究由北京医科大学附属第一医院任组长单位，组织分布于北京、华北、东北、西北和华东的40多个医院参加，完成了1346例急性脑梗塞的临床研究。其中男836例(占62.1%)，女510例(37.9%)，平均年龄63.58±0.25岁，平均病程52.7±1.2小时，轻型778例(57.8%)，中型508例(37.7%)，重型60例(4.5%)。用药前病情在进展者519例(38.6%)，停顿者747例(55.5%)，已好转者招例(2.1%)，不详者52例(3.9%)。给药剂量、方法、观察指标、疗效评分标准均同Ⅱ临床试验，但给药时间改为14天一疗程。
    试验结果表明，基本痊愈237例(占17.7%)，显著进步777例(57.9%)，进步249例(18.6%)，无效78例(5.8%)，总有效率为94.2%，无恶化。结果与Ⅱ期临床研究相似。在各项指标中，神经功能缺损治疗前评分为15.3±7.9，治疗后为6.6±6.7，有显著差异(P<0.001)。在实验室指标上，治疗后血小板聚集率、血浆粘度、纤维蛋白原、血球压积均明显下降，凝血酶原时间则明显延长，胆固醇和甘油三脂亦明显下降。
    不良反应主要为血小板减少(<60X10⁹/L)，发生率约7.7%，但有专家认为这亦是疗效的一种表现。停药后均能自动恢复。血小板减少与出血无平行关系，发生出血不良反应占1.6%。血小板减少病例中，有4例伴有牙龈、皮下出血。一例在用药三天后，CT检查见有梗塞后出血灶。出血量少，临床症状无加重，血小板数为73X10⁹／L，停药后经处理，好转出院。其他不良反应偶见口干(2例)、头痛(2例)、头晕(3例)、恶心(2例)、白细胞下降(1例)，均为一过性，未影响治疗。

参考文献
[1]陈清澄，王晴川，刘广芬：蕲蛇酶(凝血酶样酶)溶液及注射液稳定性研究。福建医学院学报1990，24(1)16-20
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[3]魏京娜，王晴川，刘广芬：尖吻蝮蛇毒凝血酶样酶在兔体内的药代动力学。中国药理学与毒理学杂志1990，4(3)213～5
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[6]陈清棠等：蕲蛇酶注射液Ⅲ期临床试验总结。(中国临床药理学杂志，发表中)